CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠

CD3/CD28 beads for human T cell activation and expansion
CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠
CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠
CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠
 
T细胞活化和扩增需要同时提供CD3/TCR信号和CD28共刺激信号。抹茶交易网经过长期优化,推出CD3/ CD28人T细胞活化/扩增磁珠产品,该磁珠通过在4.5µm粒径磁珠表面耦连抗CD3和抗CD28单克隆抗体,可在体外模拟体内抗原提呈细胞对T细胞进行高效的活化与扩增。

规格:1ml    5*1ml
   

              产品号:

              # CS-21001-1
              # CS-21001-5


             
产品介绍:
T细胞活化和扩增需要同时提供CD3/TCR信号和CD28共刺激信号。抹茶交易网经过长期优化,推出CD3/ CD28人T细胞活化/扩增磁珠产品,该磁珠通过在4.5µm粒径磁珠表面耦连抗CD3和抗CD28单克隆抗体,可在体外模拟体内抗原提呈细胞对T细胞进行高效的活化与扩增。

产品信息:

产品名称

货号

规格

储存条件

CD3/CD28T细胞活化/扩增磁珠

CS-21001-1

1ml

4oC

CS-21001-5

5*1ml

4 oC


其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂和组分:


培养基;

胎牛血清;

磷酸盐缓冲液PBS;

EDTA;


使用说明:

CD3/CD28T细胞活化/扩增磁珠说明书(点击下载)


请详细阅读使用说明后再开始相关实验。

CD3/CD28 单抗偶联磁珠的准备
使用前,需要洗去磁珠的保存液。
1.在使用前,将磁珠悬浮液震荡重悬30秒,以获得均一的悬浮液;
2.根据需要,转移适量磁珠悬浮液至Eppendorf管中;
3.加入等体积的清洗液,或至少1ml磁珠清洗液,通过震荡5秒或反复吹打10次均匀混合;
4.将管子置于磁力架3分钟,在分离过程中,不要将管子从磁力架上取下;
注:请勿使用低于推荐的时间,以免磁珠脱落损失。
5.用移液器将管中上清液移除(此时管置于磁力架上);
6.重复洗一次(步骤3-4),然后将磁珠重悬于缓冲液或培养基备用;

人T细胞的活化
1.按照标准程序获得纯化的2×106个T细胞;
2.加入20µL本品磁珠,以获得1:1的磁珠与细胞比例(不同细胞量参考培养体积建议表);
3.根据特定实验要求,在37°C的CO2细胞培养箱中培养;
4.收集活化的T细胞,直接用于进一步分析。
5.对于流式细胞仪应用,在染色前应去除磁珠。将细胞悬液收集至Eppendorf管中,置于磁力架1-2分钟,将含有细胞的上清液转移至新Eppendorf管中,弃磁珠。

人T细胞的扩增
1.以1×106个纯化的T细胞/ mL的浓度将细胞接种于合适的组织培养板或组织培养瓶中;
2.按照每1×106个纯化的T细胞加入10 µL本品磁珠,确保磁珠与细胞的比例为1:1;
3.培养基中加入30 U/mL 重组人IL-2; 
4.根据特定实验要求,在37°C的CO2细胞培养箱中培养;
5.每日检查细胞培养物,观察细胞大小和形状;
6.彻底重悬后,每两天计数细胞;
7.当细胞密度超过2.5×106个细胞/ ml或当培养基变成黄色时,将细胞适当扩孔。

注意事项
1.在使用前,必须将磁珠充分混匀重悬;
2.切勿使用低于推荐剂量的磁珠;
3.使用过程中避免产生气泡;
4.在流式细胞仪分析之前,应去除磁珠以及与磁珠结合的细胞。T细胞激活后的2-3天,一些细胞会牢固地与磁珠结合,可通过移液彻底重悬磁珠/细胞悬液,在磁力架上分离磁珠和细胞,收集含有T细胞的上清液。
5.当使用细胞进行蛋白质组学或基因表达等分子水平研究时,在去除磁珠之前需先裂解细胞。

附录


1. 磁珠:细胞=1:1时培养基及磁珠体积推荐表


数据展示:


图1:使用抹茶CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠活化人CD3+ T细胞,磁珠与细胞比例1:1,活化24小时后显微镜拍照记录T细胞克隆形成明显。

2:使用抹茶CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠活化人CD3+ T细胞,磁珠与细胞比例1:1,活化24小时后流式染色CD25/CD69鉴定T细胞活化优秀。

3:使用抹茶CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠活化人CD3+ T细胞,磁珠与细胞比例1:1,活化24小时后感染GFP慢mxc抹茶平台,MOI=1.0(即mxc抹茶平台颗粒与T细胞数目比例为1:1),感染效率达~60%多。

4:使用抹茶CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠活化培养人CD3+ T细胞,磁珠与细胞比例1:1,10天内扩增达100倍以上。