支原体检测试剂盒

Mycoplasma Determination Kit
支原体检测试剂盒
支原体检测试剂盒
支原体检测试剂盒

抹茶交易网(苏州)支原体检测试剂盒主要采用PCR方法对各种生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等)支原体感染的检测。它综合了几个优势:灵敏、特异、快速并且可以用直接用细胞培养上清液检测。

规格: 50μl 250μl
   

              产品号:

              # PT-myco


             
产品介绍:
细胞培养是生命科学研究中常用的实验手段。不同于其它常用的实验方法,细胞培养是一个动态的连续过程,细胞通常会对操作失误或污染物有所反应,这些反应往往表现出不正常的细胞状态或培养基外观。如果受到支原体污染时,细胞形态较之无明显变化,污染前期极易被忽视,直到污染非常严重时才能发现。受污染的细胞膜上可能有几百个支原体,这些支原体竞争营养并释放有毒的代谢产物,严重影响实验结果。污染来源包括工作环境、操作者本身(一些支原体是人体的正常菌群)、培养基、血清、细胞交叉污染、实验器材和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。
确认细胞培养过程中出现问题的潜在原因是一项困难且耗时的任务,在细胞培养中,任何突然的变化都应该被怀疑,同时良好的试验规范和定期检测支原体污染也十分必要。支原体检测的方法有很多种,如直接培养、DNA 荧光染色、ELISA和PCR 法等。
抹茶交易网(苏州)支原体检测试剂盒主要采用PCR方法对各种生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等)支原体感染的检测。它综合了几个优势:灵敏、特异、快速并且可以用直接用细胞培养上清液检测。本制品通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中的支原体,所用引物为根据支原体16S-23S rRNA序列保守区域设计,只特异性扩增支原体 DNA,检出灵敏度与特异性均较高。PCR 扩增及电泳分析只需数个小时,操作方便简单。

产品信息:
组分编号
组分名称
规格
储存条件
-A
Green Taq Mix
250µl
-20℃
-B
ddH2O
250µl
-C
Positive Control Template
50µl
-D
Primers
50µl

使用说明:

请详细阅读使用说明后再开始相关实验。

1.待测细胞连续传代3次或培养至两周;

2.细胞达到80% confluency或以上的时候,取1ml上清,进行低速离心(300g,5min,4℃);

3.离心结束后取950μl上清液,转移至新的无菌EP管中,以去除培养基中的细胞;

4.将上清液高速离心(12000g,10min,4℃),离心结束后,去除900μl上清,剩余50ul用以重悬沉淀(可能肉眼不可见);

5.将重悬好的沉淀放置4度冰箱,作为PCR的模板备用;

根据下表,配制PCR反应液:
试剂
实验组
阳性对照
阴性对照
A
12.5µl
12.5µl
12.5µl
待测样品
5µl
C
5µl
B
5.5µl
5.5µl
10.5µl
D
2µl
2µl
2µl
注:为防止 Positive Control Template 污染,请将实验组和阴性对照组加完以后,最后再将 c液加入阳性对照组

6.PCR程序:

步骤
温度
反应时间
循环数
Step 1
95℃
5min
1
Step 2
94℃
30s
5
50℃
30s
72℃
35s
Step 3
94℃
15s
23
56℃
15s
72℃
30s
Hold
12℃

7.制备DNA gel:称取一定量Argrose粉末,用1X TAE buffer配制成1.5%的DNA GEL;

8.待PCR反应结束后,取8-10μl的PCR 反应液(无需要加 loading buffer)直接进行1.5%琼脂糖凝胶电泳,确认PCR扩增产物;

9.目的条带为518bp。示例如下:



推荐使用频率:

新细胞进入实验室

必检

液氮保存前

必检

定期常规

每月一次

发现污染后

每周一次

发现细胞异常

随时检测